Hybridation de l'ADN

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Hybridation de l'ADN

Message par Erwinia le Lun 17 Jan - 12:13

L'hybridation de l'ADN est un principe de biologie moléculaire, basé sur les propriétés d'appariemment des bases complémentaires d'acides nucléiques. Ce principe est utilisé dans différentes techniques donnant la possibilité la mise en évidence de la présence de molécule d'acide nucléiques spécifiques, c'est entre autres le principe utilisé pour la phase de visualisation suivant un Northern blot ou un Southern blot.
L'hybridation de l'ADN est aussi le nom d'une méthode d'analyse phylogénétique développée au début des années 1960.


Principes


L'ADN natif (non dénaturé) est constitué de deux molécules (chaînes) associées par des liaisons non covalentes. Les deux chaînes sont complémentaires et antiparallèles selon la règle de Chargaff, des liaisons de faible énergie (liaison hydrogène) s'établissant entre leurs bases azotées d'une manière spécifique, ce qui sert à connaitre la séquence d'enchainement des bases d'une chaîne quand la séquence de l'autre est connue. Une chaîne libre peut par conséquent s'associer à une autre chaîne libre pourvu que leur séquence soit complémentaires : cette association spécifique est nommée hybridation moléculaire.

Dénaturation de l'ADN


[Vous devez être inscrit et connecté pour voir cette image] Article détaillé : [Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien].

Tout d'abord, il faut [Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien]. Un chauffage entre 50°C et 80°C provoque la rupture des liaisons hydrogène et par conséquent la séparation des deux chaînes complémentaires.
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Formation d'un hétéroduplex


Par la suite deux brins monocaténaires issus de 2 ADN différents sont mis en contact, en présence d'[Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien] spécifiques ([Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien]). La molécule bicaténaire obtenue (hétéroduplex) possède une plus ou moins grande proportion de bases complémentaires qui établissent, entre elles, de nouvelles liaisons hydrogène.
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Dénaturation des hétéroduplex


Dans un dernier temps, les différents hétéroduplex sont chauffés. La température à laquelle 50 % des liaisons hydrogène sont rompues est mesurée et comparée à celle de la molécule naturelle (ADN témoin). Il y a proportionnalité entre l'écart entre ces deux températures et le nombre des liaisons établies lors de l'hybridation.
Plus la température de dénaturation est élevée (proche de celle de la molécule d'ADN témoin), plus la similarité entre bases complémentaires est grande et par conséquent les espèces proches.
Il peut s'agir d'appariement de sondes, d'amorces en PCR dans un thermocycleur.
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Applications


Cette technique sert à déterminer le lien de parenté entre des espèces (Phylogénie) ; par exemple :

  • La classification des oiseaux de Sibley et Monrœ ;
  • les places respectives d'Homo neanderthalensis et d'Homo sapiens.
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